抗体检测通用ELISA操作流程（效价测定）

更新时间：2025-07-25

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抗体检测通用ELISA操作流程（效价测定）

1.包被步骤：

1）用包被缓冲液配制1-10 μg/ml抗原溶液（现配现用）

2）向高结合力ELISA板（货号80112）每孔加入100μl抗原溶液，覆以封板膜，室温轻摇孵育2-6小时或4℃过夜

3）吸弃溶液，用洗涤缓冲液洗板2次

2.封闭步骤：

1）用封闭缓冲液母液配制工作液，每孔加入300 μl，室温轻摇孵育2-6小时或4℃过夜

2）吸弃封闭液并在吸水纸上拍干，板子可立即使用或密封保存于4℃备用

抗体效价检测：

1）用抗体稀释液对免疫前/免疫后血清进行梯度稀释（1:100至1:100,000），每孔加入100ul。覆以封板膜，室温轻摇孵育30分钟。

2）吸弃液体，用洗涤缓冲液洗板5次（每次200-300 μl，洗涤不充分会导致高背景）

3）用抗体稀释液配制HRP标记抗兔二抗（1:5,000-1:20,000），每孔加入100μl（稀释不当会导致显色过弱或背景过高）

4）覆以封板膜，室温轻摇孵育30分钟

5）吸弃液体，洗板5次后拍干

6）每孔加入100 μl现成TMB底物溶液

7）覆以封板膜，室温轻摇孵育至阳性孔出现蓝色（最长15分钟）

8）每孔加入100 μl终止液，蓝色转为黄色

9）450 nm波长下读取吸光度

注：所有试剂需使用新枪头及加液槽添加。除特异性抗原/抗体外，ELISA所需全部试剂均可通过试剂盒获取。

注意事项：

1）本ELISA流程适用于针对纯化抗原（蛋白质或多肽）产生的抗体的定性检测，不适用于血清或其他体液中抗体浓度的定量测定。

2）本流程默认一抗来自兔源，若使用其他宿主动物需选用相应二抗。

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品牌	货号	产品名称	英文名称
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